Is é crómatagrafaíocht leachtach an príomh-mhodh chun ábhar gach comhpháirte agus neamhíonachtaí in amhábhar, idirmheánacha, ullmhóidí agus ábhair phacáistithe a thástáil, ach níl modhanna caighdeánacha ag go leor substaintí chun brath orthu, agus mar sin tá sé dosheachanta modhanna nua a fhorbairt. I bhforbairt modhanna céime leachtacha, is é an colún crómatagrafaíochta croílár crómatagrafaíocht leachtach, agus mar sin tá sé ríthábhachtach conas colún crómatagrafaíochta oiriúnach a roghnú. San Airteagal seo, míneoidh an t-údar conas colún crómatagrafaíocht leachtach a roghnú ó thrí ghné: smaointe foriomlána, breithnithe agus raon feidhme an iarratais.
A. Smaointe foriomlána maidir le colúin crómatagrafaíochta leachta a roghnú
1. Déan airíonna fisiceacha agus ceimiceacha an anailísí a mheas: mar struchtúr ceimiceach, tuaslagthacht, cobhsaíocht (cosúil le cibé an bhfuil sé éasca a ocsaídiú / a laghdú / a hidrealú), aigéadacht agus alcaileacht, etc., go háirithe is é an struchtúr ceimiceach an eochair fachtóir chun na hairíonna a chinneadh, mar shampla go bhfuil ionsú ultraivialait láidir agus fluaraiseacht láidir ag an ngrúpa comhchuingeach;
2. Déan cuspóir na hanailíse a chinneadh: cibé an bhfuil gá le scaradh ard, éifeachtacht ard colún, am anailíse gearr, íogaireacht ard, friotaíocht ardbhrú, saol fada colún, costas íseal, etc.;
- Roghnaigh colún crómatagrafaíochta oiriúnach: tuiscint a fháil ar chomhdhéanamh, airíonna fisiceacha agus ceimiceacha an fhiller crómatagrafaíochta, mar shampla méid na gcáithníní, méid pore, caoinfhulaingt teochta, caoinfhulaingt pH, asaithe an anailísí, etc.
- Breithnithe maidir le colúin crómatagrafaíochta leachta a roghnú
Pléifear sa chaibidil seo na tosca atá le cur san áireamh agus colún crómatagrafaíochta á roghnú ó thaobh airíonna fisiceacha agus ceimiceacha an cholúin chrómatagrafaíochta féin. 2.1 maitrís filler
2.1.1 Maitrís glóthach shilice Is é an maitrís filler den chuid is mó de na colúin crómatagrafaíochta leachta ná glóthach shilice. Tá ard-íonacht, ísealchostas, neart meicniúil ard ag an gcineál filler seo, agus is furasta grúpaí a mhodhnú (cosúil le nascáil feinile, nascáil aimín, nascáil cianó, etc.), ach tá an luach pH agus an raon teochta a fhulaingíonn sé teoranta: an Is é raon pH an chuid is mó de líontóirí maitrís glóthach shilice ná 2 go 8, ach is féidir leis an raon pH de chéimeanna bannaithe glóthacha shilice sainmhodhnaithe a bheith chomh leathan le 1.5 go 10, agus tá céimeanna bannaithe glóthacha shilice sainmhodhnaithe ann freisin atá cobhsaí ag pH íseal, mar Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, atá cobhsaí ag pH 1 go 8; is gnách go bhfuil teorainn teocht uachtarach an mhaitrís glóthach shilice 60 ℃, agus is féidir le roinnt colúin crómatagrafaíochta teocht 40 ℃ a fhulaingt ag pH ard.
2.1.2 Maitrís polaiméir Is iad líontóirí polaiméire den chuid is mó polaistiréin-dévinilbeinséin nó polymethacrylate. Is iad na buntáistí a bhaineann leo ná gur féidir leo raon leathan pH a fhulaingt - is féidir iad a úsáid sa raon 1 go 14, agus tá siad níos resistant do theocht ard (is féidir leo teacht os cionn 80 °C). I gcomparáid le líontóirí C18 atá bunaithe ar shilice, tá hidreafóbacht níos láidre ag an gcineál filler seo, agus tá an polaiméir macroporous an-éifeachtach chun samplaí cosúil le próitéiní a scaradh. Is iad na míbhuntáistí a bhaineann leis ná go bhfuil éifeachtacht an cholúin níos ísle agus go bhfuil an neart meicniúil níos laige ná líon na líontóirí atá bunaithe ar shilice. 2.2 Cruth na gcáithníní
Is cáithníní sféarúla an chuid is mó de líontóirí HPLC nua-aimseartha, ach uaireanta is cáithníní neamhrialta iad. Is féidir le cáithníní sféarúla brú colún níos ísle, éifeachtacht colún níos airde, cobhsaíocht agus saolré níos faide a sholáthar; nuair a úsáidtear céimeanna soghluaiste ard-slaodachta (cosúil le haigéad fosfarach) nó nuair a bhíonn an réiteach samplach slaodach, tá achar dromchla sonrach níos mó ag cáithníní neamhrialta, rud a chabhródh le gníomh iomlán an dá chéim, agus tá an praghas sách íseal. 2.3 Méid na gcáithníní
Dá lú méid na gcáithníní, is airde an éifeachtacht colún agus is airde an scaradh, ach is measa an fhriotaíocht ardbhrú. Is é an colún is coitianta a úsáidtear an colún méid na gcáithníní 5 μm; má tá an ceanglas deighilte ard, is féidir filler 1.5-3 μm a roghnú, rud a chabhródh le fadhb deighilte roinnt maitrís casta agus samplaí il-chomhpháirt a réiteach. Is féidir le UPLC líontóirí 1.5 μm a úsáid; Is minic a úsáidtear líontóirí 10 μm nó méid cáithníní níos mó le haghaidh colúin leath-ullmhúcháin nó ullmhúcháin. 2.4 Ábhar carbóin
Tagraíonn ábhar carbóin don chomhréir den chéim bhanna ar dhromchla glóthach shilice, a bhaineann le hachar dromchla sonrach agus clúdach céim bhanna. Soláthraíonn ábhar ardcharbóin cumas colún ard agus ard-réiteach, agus is minic a úsáidtear é le haghaidh samplaí casta a éilíonn scaradh ard, ach mar gheall ar an am idirghníomhaíochta fada idir an dá chéim, tá an t-am anailíse fada; tá am anailíse níos giorra ag colúin crómatagrafaíochta le hábhar ísealcharbóin agus féadann siad roghnaíochtaí éagsúla a thaispeáint, agus is minic a úsáidtear iad le haghaidh samplaí simplí a dteastaíonn anailís tapa orthu agus samplaí a dteastaíonn coinníollacha ardchéime uiscí orthu. Go ginearálta, tá an cion carbóin de C18 sa raon ó 7% go 19%. 2.5 Méid pore agus achar dromchla ar leith
Is cáithníní scagach iad meáin asaithe HPLC, agus tarlaíonn an chuid is mó idirghníomhaíochtaí sna pores. Dá bhrí sin, ní mór do mhóilíní dul isteach sna pores a bheith adsorbed agus scartha.
Is dhá choincheap chomhlántacha iad méid pore agus achar dromchla sonrach. Ciallaíonn méid pore beag achar dromchla sonrach mór, agus vice versa. Is féidir le limistéar mór dromchla sonrach an t-idirghníomhú idir móilíní samplacha agus céimeanna nasctha a mhéadú, coinneáil a fheabhsú, luchtú sampla agus cumas colún a mhéadú, agus comhpháirteanna casta a scaradh. Baineann líontóirí go hiomlán scagach leis an gcineál seo líontóirí. Dóibh siúd a bhfuil riachtanais ard deighilte acu, moltar líontóirí a roghnú le hachar dromchla sonrach mór; is féidir le hachar dromchla sonrach beag brú ar ais a laghdú, éifeachtacht colún a fheabhsú, agus am cothromaíochta a laghdú, atá oiriúnach le haghaidh anailíse grádáin. Baineann líontóirí croí-bhlaosc leis an gcineál seo líontóirí. Ar an mbonn a bhaineann le scaradh a chinntiú, moltar líontóirí a roghnú le hachar dromchla sonrach beag dóibh siúd a bhfuil riachtanais ardéifeachtúlachta anailíse acu. 2.6 Toirt pore agus neart meicniúil
Tagraíonn toirt pore, ar a dtugtar “toirt pore” freisin, do mhéid na toirte neamhní in aghaidh an aonaid cháithnín. Féadann sé neart meicniúil an fhiller a léiriú go maith. Tá neart meicniúil líontóirí le líon mór pore beagán níos laige ná neart líontóirí le toirt pore beag. Úsáidtear líontóirí le toirt pore níos lú ná nó cothrom le 1.5 mL/g don scaradh HPLC den chuid is mó, agus úsáidtear líontóirí le toirt pore níos mó ná 1.5 mL/g go príomha le haghaidh crómatagrafaíocht eisiata mhóilíneach agus crómatagrafaíocht ísealbhrú. 2.7 Ráta uasteorannaithe
Is féidir le uasteorannú na buaiceanna fuíll a laghdú mar gheall ar an idirghníomhú idir comhdhúile agus grúpaí silanol nochta (cosúil le nascadh ianach idir comhdhúile alcaileach agus grúpaí silanol, fórsaí van der Waals agus bannaí hidrigine idir comhdhúile aigéadacha agus grúpaí silanol), agus ar an gcaoi sin feabhas a chur ar éifeachtúlacht colúin agus buaicchruth. . Cruthóidh céimeanna bannaithe gan teorainn roghnaíochtaí éagsúla i gcoibhneas leis na céimeanna bannaithe caipínithe, go háirithe i gcás samplaí polacha.
- Scóip feidhme na gcolún crómatagrafaíochta leachta éagsúla
Déanfaidh an chaibidil seo cur síos ar raon feidhme iarratais cineálacha éagsúla colúin crómatagrafaíochta leachta trí roinnt cásanna.
3.1 Colún crómatagrafach de chéim droim ar ais C18
Is é an colún C18 an colún céim droim ar ais is coitianta a úsáidtear, ar féidir leis tástálacha ábhar agus eisíontais an chuid is mó de shubstaintí orgánacha a chomhlíonadh, agus tá sé infheidhme maidir le substaintí meán-pholacha, lag-polar agus neamhpholacha. Ba cheart cineál agus sonraíocht colún crómatagrafaíochta C18 a roghnú de réir na gceanglas deighilte ar leith. Mar shampla, i gcás substaintí a bhfuil riachtanais deighilte arda acu, is minic a úsáidtear sonraíochtaí 5 μm*4.6 mm*250 mm; i gcás substaintí a bhfuil maitrísí deighilte coimpléascacha acu agus polaraíocht chomhchosúil, is féidir sonraíochtaí 4 μm*4.6 mm*250 mm nó méideanna cáithníní níos lú a úsáid. Mar shampla, d’úsáid an t-údar colún 3 μm * 4.6 mm * 250 mm chun dhá eisíontas géineatocsaineacha in API celecoxib a bhrath. Is féidir le scaradh an dá shubstaint 2.9 a bhaint amach, atá den scoth. Ina theannta sin, faoin mbonn a bhaineann le scaradh a áirithiú, má tá gá le hanailís tapa, is minic a roghnaítear colún gearr 10 mm nó 15 mm. Mar shampla, nuair a d’úsáid an t-údar LC-MS/MS chun eisíontas géineatocsaineach a bhrath in API fosfáit piperaquine, úsáideadh colún 3 μm * 2.1 mm * 100 mm. Ba é 2.0 an scaradh idir an eisíontas agus an phríomh-chomhpháirt, agus is féidir an bhrath sampla a chríochnú i 5 nóiméad. 3.2 Colún feanile céim droim ar ais
Is cineál colún céime droim ar ais é colún feanile freisin. Tá roghnaíocht láidir ag an gcineál seo colún le haghaidh comhdhúile aramatacha. Má tá freagra na gcomhdhúile aramatacha arna dtomhas ag gnáthcholún C18 lag, is féidir leat smaoineamh ar an gcolún feanile a athsholáthar. Mar shampla, nuair a bhí mé ag déanamh API celecoxib, bhí an freagra príomh-chomhpháirt arna thomhas ag colún feanile an mhonaróra céanna agus an tsonraíocht chéanna (ar fad 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) thart ar 7 n-uaire níos mó ná an colún C18. 3.3 Colún de ghnáthchéim
Mar fhorlíonadh éifeachtach ar cholún céim droim ar ais, tá colún gnáthchéime oiriúnach do chomhdhúile an-pholacha. Má tá an buaicphointe fós an-tapa agus é ag eluting le níos mó ná 90% de chéim uiscí sa cholún droim ar ais, agus fiú gar do bhuaic an tuaslagóra agus forluí leis, is féidir leat smaoineamh ar an gcolún gnáthchéime a athsholáthar. Áirítear leis an gcineál colún seo colún hilic, colún aimín, colún cianó, etc.
3.3.1 Colún Hilic De ghnáth neadaíonn colún Hilic grúpaí hidreafaileacha sa slabhra nasctha ailcile chun an fhreagairt ar shubstaintí polacha a fheabhsú. Tá an cineál colún seo oiriúnach chun anailís a dhéanamh ar shubstaintí siúcra. Bhain an t-údar úsáid as an gcineál seo colún agus é ag déanamh ábhar agus substaintí gaolmhara xylose agus a díorthaigh. Is féidir na isiméirí de dhíorthach xylose a dheighilt go maith freisin;
3.3.2 Colún aimín agus colún cyano Tagraíonn colún aimín agus colún cianó do thabhairt isteach modhnuithe aimín agus cianó ag deireadh an slabhra nasctha ailcile, faoi seach, chun an roghnaíocht a fheabhsú do shubstaintí speisialta: mar shampla, is rogha maith é colún aimín chun siúcraí, aimínaigéid, bunanna agus amides a dheighilt; tá roghnaíocht níos fearr ag colún cianó nuair a bhíonn substaintí struchtúracha comhchosúla hidriginithe agus neamhhidriginithe á scaradh de bharr bannaí comhchuingeacha a bheith ann. Is minic is féidir colún aimín agus colún cianó a aistriú idir colún gnáthchéime agus colún céim droim ar ais, ach ní mholtar athrú go minic. 3.4 Colún Chiral
Tá colún ciriúil, mar a thugann an t-ainm le tuiscint, oiriúnach chun comhdhúile ciriúla a scaradh agus a anailísiú, go háirithe i réimse na cógaisíochta. Is féidir an cineál colún seo a mheas nuair nach féidir le colúin ghnáthchéime droim ar ais agus gnáthchéim scaradh isiméirí a bhaint amach. Mar shampla, d'úsáid an t-údar colún ciriúil 5 μm*4.6 mm * 250 mm chun an dá isiméir de 1,2-défheinileitiléine-aimín a scaradh: (1S, 2S)-1, 2-défheinileitiléineaimín agus (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, agus shroich an scaradh idir an dá thart ar 2.0. Mar sin féin, bíonn colúin chiriúla níos daoire ná cineálacha eile colún, 1W+/píosa de ghnáth. Má tá gá le colúin den sórt sin, ní mór don aonad buiséad leordhóthanach a dhéanamh. 3.5 Colún malairte ian
Tá colúin malairte ian oiriúnach chun iain luchtaithe a scaradh agus a anailísiú, mar shampla iain, próitéiní, aigéid núicléacha, agus roinnt substaintí siúcra. De réir an chineáil filler, roinntear iad i gcolúin malartaithe cataithe, colúin malartaithe anion, agus colúin malartaithe comhaid láidir.
I measc na gcolún malairte cation tá colúin atá bunaithe ar chailciam agus hidrigin-bhunaithe, atá oiriúnach go príomha chun anailís a dhéanamh ar shubstaintí cationic amhail aimínaigéid. Mar shampla, d'úsáid an t-údar colúin bunaithe ar chailciam agus é ag déanamh anailíse ar gluconate cailciam agus aicéatáit chailciam i dtuaslagán flushing. Bhí freagraí láidre ag an dá shubstaint ag λ = 210nm, agus shroich an chéim deighilte 3.0; bhain an t-údar úsáid as colúin hidrigine-bhunaithe agus é ag déanamh anailíse ar shubstaintí a bhain le glúcós. Bhí ard-íogaireacht ag baint le roinnt mórshubstaintí gaolmhara – maltós, maltóis agus fruchtós – faoi bhrathadóirí difreálaigh, le teorainn braite chomh híseal le 0.5 ppm agus céim deighilte 2.0-2.5.
Tá colúin malairte anion oiriúnach go príomha chun anailís a dhéanamh ar shubstaintí anionic amhail aigéid orgánacha agus iain halaigine; tá cumas malartaithe ian níos airde agus roghnaíocht níos airde ag colúin malartaithe cation láidir, agus tá siad oiriúnach chun samplaí casta a scaradh agus a anailísiú.
Níl sa mhéid thuas ach réamhrá ar na cineálacha agus na raonta feidhmchlár atá ag roinnt colún comónta crómatagrafaíochta leachta in éineacht le taithí an údair féin. Tá cineálacha speisialta eile de cholúin chromatagrafaíochta in iarratais iarbhír, mar shampla colúin crómatagrafaíochta mór-pore, colúin crómatagrafaíochta beag-pore, colúin crómatagrafaíochta cleamhnais, colúin crómatagrafaíochta ilmhód, colúin crómatagrafaíochta leachtacha ultra-ardfheidhmíochta (UHPLC), colúin crómatagrafaíochta sreabhach supercritical ( SFC), srl. Tá ról tábhachtach acu i réimsí éagsúla. Ba cheart an cineál sonrach colún crómatagrafaíochta a roghnú de réir struchtúr agus airíonna an tsampla, riachtanais scaradh agus críocha eile.
Am postála: Meitheamh-14-2024